Déi mobil Phas ass gläichwäerteg mat der flësseger Phase vum Blutt, an et gi verschidde Saachen op opmierksam ze bezuelen beim Gebrauch. Dorënner sinn et e puer "Fallen", déi oppassen musse ginn.
01. Mooss de pH vun der mobiler Phase no der Zousatz vun organesche Léisungsmëttel
Wann Dir de pH mat engem organeschen Additiv moosst, wäert de pH deen Dir kritt anescht sinn wéi ier Dir den organesche Léisungsmëttel bäidréit. Wéi och ëmmer, déi wichtegst Saach ass konsequent ze sinn. Wann Dir ëmmer de pH moosst nodeems Dir den organesche Léisungsmëttel bäigefüügt hutt, gitt sécher datt Dir Är Schrëtt an der Method benotzt, déi Dir benotzt, fir datt anerer déi selwecht Methode verfollegen. Dës Method ass net 100% korrekt, awer op d'mannst wäert et d'Method konsequent halen. Dëst kann méi wichteg sinn wéi e genee pH Wäert ze kréien.
02. Nee Prellbock benotzt
Den Zweck vun engem Puffer ass den pH ze kontrolléieren an ze vermeiden datt et ännert. Vill aner Methoden änneren den pH vun der mobiler Phase, wat Verréckelung vun der Retentiounszäit, der Peakform an der Peakreaktioun verursaache kann.
Mieresäure, TFA, asw sinn net Puffer
03. Benotzt net Puffer am normale pH-Beräich
All Puffer huet eng 2 pH Eenheet Beräich Breet, an deem et déi bescht pH Stabilitéit gëtt. Bufferen ausserhalb vun dëser Fënster ginn net effektiv Resistenz géint pH Ännerungen. Entweder benotzt e Puffer am richtege Beräich, oder wielt e Puffer deen de pH-Bereich deckt deen Dir braucht.
04. Fügt Puffer op organesch Léisung
D'Mëschung vun enger Pufferléisung mat enger organescher Phase wäert héchstwahrscheinlech datt de Puffer ausfällt. A ville Fäll, och wann Nidderschlag geschitt ass, ass et nach ëmmer schwéier z'entdecken. Vergiesst net ëmmer d'organesch Léisung an d'wässerlech Phase ze addéieren, wat d'Chance vu Puffer-Nidderschlag staark reduzéiere kann.
05. Mix de Konzentratiounsgradient vun 0% mat enger Pompel
Pompelen, déi haut verfügbar sinn, kënnen effektiv mobil Phasen mëschen an inline degaséieren, awer net jiddereen, deen Är Method benotzt, wäert eng héichqualitativ Pompel hunn. Mix A a B an eng eenzeg Léisung a lafen se 100% inline.
Zum Beispill kann 950 ml vun der organescher Startmëschung virbereet ginn andeems se mat 50 ml Waasser vermëschen. De Virdeel dovun ass datt et d'Verännerlechkeet tëscht HPLCs reduzéiere kann an d'Méiglechkeet vu Blasen a Nidderschlag am System reduzéieren. Et ass derwäert ze bemierken datt d'Verhältnis vun der Pompelmëschung 95:5 ass, wat net heescht datt d'pre-gemëschte Retentiounszäit an der Fläsch och 95:5 ass.
06. Benotzt net déi richteg modifizéiert Säure (Basis) fir de Puffer z'änneren
Benotzt nëmmen d'Säure oder d'Basis déi de Puffersalz bilden deen Dir benotzt. Zum Beispill soll e Natriumphosphat-Puffer nëmme mat Phosphorsäure oder Natriumhydroxid virbereet ginn.
07. Net uginn all Informatiounen iwwert de Puffer an der Method, wéi dobäi 5g vunNatriumphosphat op 1000ml Waasser.
D'Zort vu Puffer bestëmmt de pH-Beräich dat ka gebuffert ginn. Déi erfuerderlech Konzentratioun bestëmmt d'Pufferstäerkt. 5 Gramm oder anhydrous Natriumphosphat a 5 Gramm Monosodiumphosphatmonohydrat hunn ënnerschiddlech Pufferstäerkten.
08. Organesch Léisungsmëttel ze addéieren virum Iwwerpréiwung
Wann déi viregt Method eng Pufferléisung fir Baseline B benotzt, an Är Method benotzt eng organesch Léisung fir Baseline B, kënnt Dir hoffentlech de Puffer an der Pompelschlauch an der Pompelkopf settelen.
09. Lift d'Fläsch an eidel déi lescht Tropfen
Et ass eng gutt Chance datt Dir net genuch mobil Phase hutt fir de ganze Laf ze kompletéieren an Är Probe fëmmt. Nieft der Méiglechkeet fir de Pompelsystem an d'Kolonn ze verbrennen, wäert d'mobil Phase komplett verdampen an d'mobil Phase uewen op der Fläsch ännert.
10. Benotzt ultrasonic degassing mobil Phase
De wichtegste Punkt ass sécherzestellen datt all Puffersalze opgeléist ginn, awer dëst ass de schlëmmste Wee fir ze entgasen a wäert déi mobil Phase séier erhëtzen, sou datt d'organesch Komponenten verdampen. Fir méi spéit onnéideg Ierger ze spueren, huelt fënnef Minutten fir Är mobil Phas ze Vakuumfilter.
Post Zäit: Aug-27-2024